14-3-3蛋白etaELISA检测试剂盒标本的采集与保存

14-3-3蛋白etaELISA检测试剂盒标本的采集与保存：
1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 小时或4oC 过夜，然后1000×g 离心20 分钟，取上清即
可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：用EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30 分钟内于2-8oC 1000×g 离心15 分钟，
取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
3、组织匀浆：
1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；
2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2 次）。
3） 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。
4、其它生物标本：请1000×g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。
操作步骤：
夹心法，一般的操作步骤为:
将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体;
加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结;
洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结;
洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结;
洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果;
间接法，一般的操作步骤为：
将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。
加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。
洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。
洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器测定塑胶盘中的吸光值，以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
竞争法，其操作步骤为：
将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。