NO含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。

测定原理：

NO 在体内或水溶液中极易氧化生成 NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在 550nm 处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算 NO 含量。 自备实验用品及仪器： 天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。（用之前震荡溶解后使用）试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。(用之前 60℃加热震荡 15min)

样品处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声3 秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 15min，取上清置于冰上待测。3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。  
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm。 2、操作表 空白管 测定管样品（μL） 100 提取液（μL） 100 试剂一（μL） 50 50 试剂二（μL） 50 50 混匀，室温静置 15min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 A550，ΔA=A 测定-A空白
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R 2= 0. 9986 1、组织样品： （1）按样本质量计算 NO 含量（μmoL/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10 -3 = 0.125×（ΔA +0.0103）÷W （2）按样本蛋白浓度计算 NO 含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样×Cpr）×10 -3 = 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、细胞： NO 含量（μmol/10 4 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）×10-3 = 0.125×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）3、其他样品： NO 含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷V 样 = 125×（ΔA +0.0103） V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL b. 用 96 孔板测定的计算公式如下 标准曲线回归方程为：y= 0.008x - 0.0103，R 2= 0. 9986 1、组织样品： （1）按样本重量计算 NO 含量（μmoL/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10 -3 = 0.25×（ΔA +0.0103）÷W （2）按样本蛋白浓度计算 NO 含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反总÷（V 样×Cpr）×10 -3 = 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr 2、细胞： NO 含量（μmol/10 4 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）×10-3 = 0.25×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）3、 其他样品： NO 含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V 反总÷V 样= 250×（ΔA +0.0103）V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
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