氨基酸(AA)含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

动物肝脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。

另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件

下及不同时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意

义。
测定原理：

氨基酸的 α -氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在 570 nm 有特征吸收峰；通过

测定 570 nm 吸光度，来计算氨基酸含量。自备仪器和用品:台式离心机、水浴锅、酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶（棕色），4℃避光保存。临用前加入 1.667 mL 无水乙醇，盖紧后充分混

匀，再加入 23.333 mL 试剂二混匀，避光保存。

试剂四：粉剂×1 管，4℃避光保存。临用前加 2 .5mL 试剂二，充分溶解。
酶液提取：
1. 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入

1mL 试剂一）进行室温匀浆，8000g，4℃离心 10min，取 200μL 上清转移到 1.5 mL EP

管中，加入 200μL 试剂二盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min，冷却至室温后

待测。

2. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL

试剂シ?シ
测定操作：
1. 酶标仪预热 30 min，调节波长到 570 nm。

2. 取 EP 管，加入 20μL 待测液，200μL 试剂二，200μL 试剂三和 20μL 试剂四，混匀后盖紧

瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温 15 min，冷却后反复颠倒 EP 管数次，于 570nm

测定吸光值，记为 A 测定管。显色后务必在 30min 内测完。
计算公式：
氨基酸含量计算公式：
使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0027x + 0.0737 R2 = 0.9994 x：亮氨酸标准品浓度（μg/mL）
y：吸光值 A
（1）按蛋白浓度计算
氨基酸含量（μg /mg prot）=370.4×(A 测定-0.0737)×V 样×(V 样总 ÷V 样)×2÷Cpr
=740.8×(A 测定-0.0737)÷Cpr
（2）按样本质量计算
氨基酸含量（μg /g 鲜重）=370.4×(A 测定-0.0737)×V 样×(V 样总 ÷V 样)×2÷W
=740.8×(A 测定-0.0737)÷W
（3）按细胞数量计算
氨基酸含量（μg /104 cell）=370.4×(A 测定-0.0737)×V 样×(V 样总 ÷V 样)×2÷细胞数量
=740.8×(A 测定-0.0737)÷细胞数量
（4）按照液体体积计算
氨基酸含量（μg /mL）=370.4×(A 测定-0.0737)×2
=740.8×(A 测定-0.0737)
W：样品质量，g；V 样：反应体系中加入样品提取液体积，0.02 mL；V 样总：样品提取液
总体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL。
注意事项：
1. 试剂盒中试剂三、试剂四均需临用前配制，且避光保存，配制好未使用完的 4℃保存且 3
天内使用完毕。
2. 为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于 2.5）
或者检测时吸光值下降很快，用试剂二稀释后再测定。
3. 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在 570nm 处无吸收峰，因此，570nm 处测定结果不含这
两种氨基酸的量。

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