γ谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

GCL 是 GSH 合成的限速酶，GCL 基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子等。GCL 活性高低对GSH 含量和GSH/GSSG比值有重要影响。
测定原理：

在 ATP 和 Mg2+存在下，GCL 催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP 去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出 GCL 活性。自备仪器和用品:可见分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、浓硫酸和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体 70mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 14mL 蒸馏水充分震荡溶解。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入蒸馏水 3.5 mL 充分震荡溶解。试剂四：液体 16mL×1 瓶，室温保存。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 30mL 蒸馏水，充分震荡溶解后，缓缓加入1.0 mL浓硫酸（自备），边加边搅拌。
酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声3 秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。3. 血清等液体：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2. 测定管：取 1.5mLEp 管，依次加入试剂一 240 μL、试剂二 260μL、试剂三60μL 和上清液 120μL，混匀后盖紧，37℃水浴准确反应 15 min； 再加入试剂四300μL，混匀后，25℃、8000g，离心 10 min，取上清 500μL，加入试剂五 500μL，混匀后盖紧，45℃水浴10min，冷却后测定 660 nm 处吸光值，记为 A 测定管。
计算公式：
γ-GT 活性计算：
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃时每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol 对硝基苯胺为1 个酶活单位。γ-GT（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷ (V 样×Cpr) ÷T=411.5×ΔA÷Cpr = 101.3×ΔA÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：37℃时每克样本每分钟催化产生 1nmol 对硝基苯胺为1 个酶活单位。γ-GT（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T
= 101.3×ΔA÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：37℃时每 10
4个细胞每分钟催化产生 1nmol 对硝基苯胺为1 个酶活单位。γ-GT（nmol/min/10
4 cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷(细胞数量×V 样÷V 样总) ÷T
= 101.3×ΔA÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：37℃时每毫升液体每分钟催化产生 1nmol 对硝基苯胺为1 个酶活单位。γ-GT（nmol/min/mL）= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷V 样÷T
= 101.3×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1×10
-3 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.87×10
3 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。注意事项：
1. 培养细胞中γ-GT 活性测定时，细胞数目须在 300 万-500 万之间，细胞中γ-GT 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。
2. 配置好的工作液 2 周内使用完毕

公司正在出售的产品：