β葡萄糖苷酶(βGC)/纤维二糖酶测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

β-GC（EC 3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化 β-糖苷键水解，

具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC 负责进一步水解纤维素二糖和纤维素

寡糖生成葡萄糖；β-GC 水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；

β-GC 能够水解植物体内野黑樱苷，释放 HCN，从而防止昆虫取食。
测定原理：

β-GC 分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有 吸收峰，

通过测定吸光值升高速率来计算 β-GC 活性。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 12mL 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的

试剂仍-20℃保存。

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、培养液、血清（浆）等液体样本：直接检测。

测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称（μL） 测定管 对照管
试剂一 120
蒸馏水 120
试剂二 150 150
样本 30 30
充分混匀，放入 37℃准确水浴 30min 后，立即放入 95℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失），
流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变），8000g，4℃，离心 5min，取上清液（在 EP 管或
96 孔板中加入下列试剂）
上清液 70 70
试剂三 130 130
充分混匀，室温静置 2min 后， 400nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。
每个测定管需设一个对照管。

计算公式：
β-木糖苷酶活性计算公式
标准曲线：y=13.226x+0.0011，R2
=0.9998；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值ΔA。
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫克蛋白 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000
 = 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每 104个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单
位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104
cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量
（万个）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样÷T×1000
 =11.34×(ΔA-0.0011)
V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.6mL；V 样：反应中样品体积，
0.2mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；
1000:1μmol/mL=1000nmol/mL
ΔA 控制在 0.01-2 范围内，若ΔA 大于 2，可适当减小样本量。
标准曲线线性范围为：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。

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