β木糖苷酶测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解

的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂

白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

测定原理：

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征

吸收峰，测定 405nm 光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

试剂组成和配制：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建

议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7

秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 液体：接检测。
测定操作：
对照管 测定管

酶液（μL） 200 200

试剂一（μL） 50

试剂二（μL） 400 350

混匀，45℃水浴 20min

试剂三（μL） 400 400

混匀，静置 5min，蒸馏水调零，405nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每

个测定管设一个对照管。 
计算公式：
β-木糖苷酶活性计算公式
标准曲线：y=13.226x+0.0011，R
2
=0.9998；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值ΔA。
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫克蛋白 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000
 = 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时每 104个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单
位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104
cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量
（万个）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷V 样÷T×1000
 =11.34×(ΔA-0.0011)
V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.6mL；V 样：反应中样品体积，
0.2mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；
1000:1μmol/mL=1000nmol/mL
ΔA 控制在 0.01-2 范围内，若ΔA 大于 2，可适当减小样本量。
标准曲线线性范围为：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。

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