半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL）广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱)，十字花科芸薹属

(如卷心菜，菜花，西兰花)，以及豆科中的合金欢属中，并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。

香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨酸亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精，以及产生丙酮酸、

乙醛、甲醛和 NH3。CSL 是内源性甲醛生成的关键酶之一，测定 CSL 活性对于研究食品安

全具有重要意义。
测定原理：

CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生丙酮酸，与 2,4-二硝基苯肼反应，在碱性条件下

显棕红色，在 510nm 下有特征吸收峰。自备仪器和用品:天平、研钵、离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加入 2mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保

存；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存，临用前加入 10mL 水溶解，用不完的试剂分装后-20℃

保存；

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂五：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL

提取液），进行冰浴匀浆，4℃浸提 40min。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 
测定操作：
对照管 测定管

样品（μL） 50 50

试剂一（μL） 25

蒸馏水（μL） 25

试剂二（μL） 25 25

充分混匀，37℃反应 20min

试剂三（μL） 100 100

试剂四（μL） 50 50

充分混匀，室温反应 5min

试剂五（μL） 250 250

充分混匀，静置 5min，吸取 200μL 至 96 孔板，测定 510nm 处吸光值，记为 A 对

照和 A 测定，△A=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。 
计算公式：
标准曲线：y = 0.7313x + 0.0027，R2 = 0.9993；x 为标准品浓度：μmol/mL；y 为吸光度△A
1. 按蛋白含量计算
C-S lyase 活性（μmol/min/mg prot）=（△A -0.0027）÷ 0.7313×V 样÷(V 样×Cpr )÷T
 =0.068×（△A-0.0027）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
C-S lyase 活性（μmol/min/g 鲜重）=（△A -0.0027）÷ 0.7313×V 样÷(V 样÷V 样总×W )÷T
 =0.068×（△A-0.0027）÷ W
V 样，加入样本上清体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；T，反应时间，20min。
注意事项
1. 若测定结果中吸光值超过 1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
香菇类样本活性较大，可能需要稀释 80-100 倍。

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