半胱氨酸(Cys)含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和 Cys。其中，Cys 是 一种含有巯基的

含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形

成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys

大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以

维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白和过敏性皮肤等作用。

测定原理：

Cys 还原磷钨酸生成钨蓝，在 600nm 处有吸收峰；通过 600nm 吸光度，计算 Cys 含量。自备仪器和用品:低温离心机、可调式移液枪、酶标仪、96 孔板、85％磷酸和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前 1 天，向试剂三中加 0.5mL 蒸馏水充分溶解，再加 85％

磷酸 0.125mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴 2h；冷却后加 2mL 蒸馏水，4℃可保存

2 周。

标准品：粉剂×1 瓶，临用前加 10 mL 蒸馏水，充分溶解。1μmol/mL 标准液，4℃避光保存。

用不完的试剂 4℃可保存 3 天。
酶液提取：
1、 液体样品中半胱氨酸提取：取 0.1mL 液体样品，加试剂一 0.9mL，充分混匀，8000g

4℃离心 10min，取上清液，待测。

2、 组织中半胱氨酸提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称

取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10 min，取上清液待

测。

3、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 50?ō?
测定操作：
1.酶标仪预热 30 min，调节波长到 600 nm。
2. 空白管：取 96 孔板，加入 20μL 蒸馏水，160μL 试剂二，20μL 试剂三，混匀后室温静置
15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 空白管。
3. 标准管：取 96 孔板，加入 20μL 标准液，160μL 试剂二，20μL 试剂三，混匀后室温静置
15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 标准管。
4. 测定管：取 96 孔板，加入 20μL 上清液，160μL 试剂二，20μL 试剂三，混匀后室温静置
15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需要做一次。

计算公式：
1. 按液体样品的体积计算：
半胱氨酸含量（μmol/mL）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空
白管)]×（V 样总÷V 样）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)
2. 按质量计算：
半胱氨酸含量（μmol/g 鲜重）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A
空白管)]×（V 样总÷V 样）÷W=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷W
3. 按照蛋白浓度计算：
半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－
A 空白管)]÷（V 样×Cpr）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷Cpr
4. 按细胞数量计算：
氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A
空白管)] ×（V 样总÷V 样×细胞数量）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷细
胞数量
C 标准品：标准品浓度，1 μmol/mL；V 标准品：反应体系中加入标准品体积，0.02mL；V
样：反应体系中加入样品提取液体积，0.02 mL；V 样总：样品提取液，1mL；W：样品质
量，g。
注意事项：
检出限为 100μmol/L。

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