大鼠12羟二十烷四烯酸(12-HETE)elisa试剂盒 英文名称： Rat 12-hydroxyeicosatetraenoic acid,12-HETE ELISA Kit 产品简称： 12-HETEelisa试剂盒 英文简称： 12-HETE elisa Kit 采用的全是原材料研，发灵敏性高，高效性，原装抗体，吸附均匀、吸附性好，回收利用率高、可靠性强，无效包退包换，公司提供免费代测服务，各种种属ELISA试剂盒产品齐全，质量可靠。

试验所需自备物品:

1.  酶标仪(450nm波长滤光片)

2.  高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3. 大鼠12羟二十烷四烯酸(12-HETE)elisa试剂 37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水

4.  吸水纸

试剂配制

1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。

2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

注意事项：

1.加样：

①实验样本过多时，可分批次操作，以减少实验时间延长造成的误差；

②大鼠12羟二十烷四烯酸(12-HETE)elisa试剂加酶试剂后，用吸水纸吸干孔外试剂；

③作定量试验时，使用加样器加注试剂，并经常校正其准确性，此外，要做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。

2.温育：

①如有两种温度，尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件；

②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察；

③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”，因此尽量采用水浴；

3.洗板：

①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；

②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅，若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出；

③为了洗涤效果好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次，或适当增加洗板的次数；

4.显色：

ELISA试剂盒中，如以四甲基联苯胺(TMB)为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以邻苯二胺(OPD)为底物，则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂，要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光，但A、B液应尽量避免接触金属器械。

5.判定：

读取结果要在15-30 min内完成，定性测定用肉眼判读试验结果时，反应板应水平距离白色背景10-15 cm；定量测定时用酶标仪读取结果，酶标仪不应置于阳光或强光照射下，需先预热15-30 min再进行测试。
操作步骤：

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.

10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

嗜冷菌计数琼脂 250g 用于乳制品中嗜冷菌菌落总数和需氧芽孢总数的测定

Psychrophilic bacteria count agar

NA培养基 250g 用于菌落总数测定

NA Medium

MPC琼脂培养基 250g 用于奶制品中菌落总数测定（阻抗法）

MPC Agar Medium

接触皿培养基 250g 用于 环境的菌落总数检测

contacts medium

普通琼脂 250g 用于一般细菌培养、转种、增菌、复壮等

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平板计数肉汤（PCB） 250g 用于滤膜法计数菌落总数

大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌检验培养基

乳糖复发酵培养基 250g 用于大肠菌群,粪大肠菌群,大肠杆菌的测定(GB标准)

Lactose Broth

去氧胆酸盐琼脂（DC） 250g 用于大肠菌群固体平板测定

Desoxycholate Lactose Agar

MR-VP培养基 250g 用于大肠杆菌的甲基红和VP试验(SN标准)

Methyl Red Voges Proskauer Broth

西蒙氏枸橼酸盐琼脂 250g 用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验(GB标准)

Simmons Citrate Agar

肠道菌计数琼脂（VRBDA） 250g 用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别

Violet Red Bile Dextrose Agar

LB肉汤 250g 用于分子生物学中大肠杆菌的培养

LB Broth

LB营养琼脂 250g 用于分子生物学中大肠杆菌的培养

LB Nutrient Agar

苯丙氨酸脱氨酶培养基 100 用于苯丙氨酸脱氨酶试验

Phenylalanine Deaminase Medium

Kovacs氏靛基质试剂盒 5ml*2 用于吲哚（靛基质）试验

K大鼠12羟二十烷四烯酸(12-HETE)elisa试剂ovacs's indole Box

甲基红指示剂盒 5ml*2 用于甲基红试验

Methyl Red Indicator Box

MUG培养基 250g 用于大肠杆菌的荧光检测(SN标准)

Columbia- MUG Medium

BDS培养基 250g 用于培养拟杆菌