大鼠1,25-二羟维生素D(3)24-羟化酶,线粒体(CYP24A1)DRGelisa试剂盒 英文名称： Rat 1,25-dihydroxyvitamin D(3)24-hydroxylase,mitochondrial(CYP24A1)ELISA kit 产品简称： CYP24A1elisa试剂盒 英文简称： CYP24A1 elisa Kit 采用的全是原材料研，发灵敏性高，高效性，原装抗体，吸附均匀、吸附性好，回收利用率高、可靠性强，无效包退包换，公司提供免费代测服务，各种种属ELISA试剂盒产品齐全，质量可靠。

试验所需自备物品:

1.  酶标仪(450nm波长滤光片)

2.  高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水

4.  吸水纸

大鼠1,25-二羟维生素D(3)24-羟化酶,线粒体(CYP24A1)DRGelisa试剂盒试剂配制

1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。

2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

注意事项：

1.加样：

①实验样本过多时，可分批次操作，以减少实验时间延长造成的误差；

②加酶试剂后，用吸水纸吸干孔外试剂；

③作定量试验时，使用加样器加注试剂，并经常校正其准确性，此外，要做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。大鼠1,25-二羟维生素D(3)24-羟化酶,线粒体(CYP24A1)DRGelisa试剂盒

2.温育：

①如有两种温度，尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件；

②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察；

③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”，因此尽量采用水浴；

3.洗板：

①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；

②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅，若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出；

③为了洗涤效果好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次，或适当增加洗板的次数；

4.显色：

ELISA试剂盒中，如以四甲基联苯胺(TMB)为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以邻苯二胺(OPD)为底物，则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂，要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光，但A、B液应尽量避免接触金属器械。

5.判定：

读取结果要在15-30 min内完成，定性测定用肉眼判读试验结果时，反应板应水平距离白色背景10-15 cm；定量测定时用酶标仪读取结果，酶标仪不应置于阳光或强光照射下，需先预热15-30 min再进行测试。
操作步骤：

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.

10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

Medium Ⅱ(for Transferring the Test Organism)

菌种和底层琼脂培养基 250g 用于抗生素效价测定的底层培养基或菌种活化

Medium I(foe Seed and Basal Layer)

营养肉汤（GB/T20944.1-2007标准） 250g 一般细菌培养，转种，复壮，增菌等，也可用于消毒效果检测

Nutrient Agar

PSB（磷酸盐缓冲液pH7.2） 9ml*20支/包 用于样品的稀释

葡萄糖肉汤 250g 用于营养苛求菌培养和肠道菌产气实验

Dextrose Broth

最小肉汤培养基 250g

the Smallest Broth Medium

EC肉汤（含小导管） 9ml*20支/包 用于粪大肠菌群的测定

ModifiedSclohtens'Broth(MSB) 250g 用于阴沟肠杆菌的培养

Modified Sclohtens' Broth

桔汁琼脂 250g 用于饮料中耐酸细菌的分离培养

Orange Serum Agar

蔗糖胰蛋白胨肉汤 200 用于致病性嗜水气单胞菌斑点酶联免疫试验

Sucrose Tryptone Broth

双料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 250g 用于大肠菌群,大肠杆菌的测定（GB、SN标准）

大鼠1,25-二羟维生素D(3)24-羟化酶,线粒体(CYP24A1)DRGelisa试剂盒消毒液中和肉汤 250g 用于中和醇类、酚类消毒剂、含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂、季*类消毒剂、醛类消毒剂等

Disinfectant Neutralization Broth

卵磷脂吐温稀释液 250g 用于样品制备水稀释

Lecithin polysorbate(LP)diluent

M-Endo肉汤 250g 用于滤膜法计数水中大肠菌群

M-Endo Broth

CCFA琼脂基础 250g 用于艰难梭菌选择性分离培养

CCFA Agar Base

CAYE培养基 250g 用于致病性大肠埃希氏菌的产毒培养

CAYE Medium

结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA） 5kg 用于大肠菌群的固体平板检测(GB、SN标准)