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L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒微量法
  • 英文名称:Gal LDH
  • 品牌:谷研
  • 产地:国产
  • 型号:100管/96样
  • 货号:GOY-SH114
  • 价格: ¥2300/盒
  • 发布日期: 2020-09-03
  • 更新日期: 2024-11-22
产品详请
产地 国产
品牌 谷研
货号 GOY-SH114
用途 仅供科研实验
英文名称 Gal LDH
包装规格 100管/96样
纯度 详见说明书%
CAS编号
别名 L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
分子式
是否进口

L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒微量法


商品属性:

检测方法

规格

货号

微量法

100管/96样

GOY-SH114

测定意义:

L-半乳糖途径是合成AsA的主要途径。Gal LDH位于线粒体内膜,负责催化植物体内AsA生物合成的 一步,也是该途径的关键酶之一,对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。

测定原理:

Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原细胞色素C(Cyt c),还原型Cyt c在550nm有吸收峰;测定还原型Cyt c增加速率,来计算Gal LDH活性。
自备仪器和用品:
台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
 

试剂组成和配制:

试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。 试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 40mL 蒸馏水,充分溶解。 试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水,充分溶解。

酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。  
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 550nm,蒸馏水调零。 2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。 3. 依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL 上清液、800μL 预热的试剂二和 100μL 试剂三,迅 速混匀后于 550nm 比色,记录 10s 和 130s 的吸光值 A1 和 A2,△A = A2﹣A1。 
计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算 Gal LDH 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。 Gal LDH (μmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×10 6÷(Cpr×V 样)÷T =289×△A ÷Cpr (2). 按样本质量计算 Gal LDH 活性单位定义:25℃中每克样品每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。 Gal LDH (μmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×10 6÷(W×V 样÷V 样总)÷T =289×△A ÷W ε:还原型 Cyt c 摩尔消光系数,17.3×10 3L/ mol/cm;d:比色皿光径(cm),1cm;V 反总:反 应体系总体积,1mL=0.001 L;10 6:1mol=1×10 6μmol;V 样:加入反应体系中上清液体积, 100μL=0.1mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公 司蛋白质含量 BCA 试剂盒;V 样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:反应 时间,2min。 注意事项: 试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。
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