产地 | 国产 |
品牌 | 谷研 |
货号 | GOY-SH114 |
用途 | 仅供科研实验 |
英文名称 | Gal LDH |
包装规格 | 100管/96样 |
纯度 | 详见说明书% |
CAS编号 | |
别名 | L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒 |
分子式 | |
是否进口 | 否 |
L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒微量法
商品属性:
检测方法 |
规格 |
货号 |
微量法 |
100管/96样 |
GOY-SH114 |
测定意义:
L-半乳糖途径是合成AsA的主要途径。Gal LDH位于线粒体内膜,负责催化植物体内AsA生物合成的 一步,也是该途径的关键酶之一,对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。
测定原理:
Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原细胞色素C(Cyt c),还原型Cyt c在550nm有吸收峰;测定还原型Cyt c增加速率,来计算Gal LDH活性。
自备仪器和用品:
台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。 试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 40mL 蒸馏水,充分溶解。 试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水,充分溶解。
酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 550nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
3. 依次在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL 上清液、800μL 预热的试剂二和 100μL 试剂三,迅
速混匀后于 550nm 比色,记录 10s 和 130s 的吸光值 A1 和 A2,△A = A2﹣A1。
计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算
Gal LDH 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH (μmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×10
6÷(Cpr×V 样)÷T
=289×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
Gal LDH 活性单位定义:25℃中每克样品每分钟还原 1μmol Cyt c 为 1 个酶活单位。
Gal LDH (μmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×10
6÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=289×△A ÷W
ε:还原型 Cyt c 摩尔消光系数,17.3×10
3L/ mol/cm;d:比色皿光径(cm),1cm;V 反总:反
应体系总体积,1mL=0.001 L;10
6:1mol=1×10
6μmol;V 样:加入反应体系中上清液体积,
100μL=0.1mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公
司蛋白质含量 BCA 试剂盒;V 样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:反应
时间,2min。
注意事项:
试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。
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