NADPH细胞色素C还原酶(NCR)测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

?胞色素 P450 酶是一组?要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中?有重要作用，尤? 是药物和毒物的代谢?NCR 作? P450 酶系的重要一员，催化氧化型 P450 还原再生?

测定原理：

NCR催化NADPH还原氧化型?胞色素c生成还原型?胞色素c，还原型?胞色素c在550nm 处有特征吸收峰?通过测定 550nm 吸光度的增加速率，来?算 NCR 活性? 自备仪器和用品? 可见分光光度??普通离心机，超速离心机?可调式移液枪?1mL 玻璃比色皿和蒸馏水?  

试剂组成和配制：

试剂一?粉剂×1 瓶，4℃保存?临用前加 100mL 蒸馏水充分溶解? 试剂??液体×1 瓶，4℃保存? 试剂й?粉剂×1 瓶，-20℃保存?临用前配制，加 2.6 mL 蒸馏水充分溶解，4℃保存? 试剂四?粉剂×1 瓶，4℃保存?临用前配制，加 550 μL 蒸馏水充分溶解，4℃保存?

酶液提取：
1?除去?胞?和线粒体等??约 0.5g 组?，加入 4℃预冷的 1 mL 试剂一，冰к充分研磨， 10 000g 4℃离心 30min，取к清液，转移到超速离心管中? 2?粗制微粒体?4℃，100 000g，离心 60min，?к清液? 3?除血红蛋白等杂质?向步骤 2 的沉淀中加 1 mL 试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g 离心 30min，?к清液? 4?最?微粒体?向步骤 3 的沉淀中加试剂? 0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存?测?  
测定操作：
1. 分光光度?预热 30 min，调节波长到 550 nm，蒸馏水调零? 2. 试剂?在 37℃水浴中预热 30min? 3. 空白管?取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 50μL 蒸馏水?900μL 试剂??50μL 试剂й和 10μL 试剂四，迅速混匀后于 550nm 处测定 2min 内吸光值变化，第 10 s 和第 130 s 吸光值分别记 ? A1 和 A2，△A 空白管=A2-A1? 4. 测定管?取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 50μL 粗酶液?900μL 试剂??50μL 试剂й和 10μL 试剂四，迅速混匀后于 550nm 处测定 2min 内吸光值变化，第 10 s 和第 130 s 吸光值分别记 ? A3 和 A4，△A 测定管=A4-A3? 注意?空白管只需要做一次? 
计算公式：
(1).按照蛋白浓度?算 活性单位定义?37℃中，?毫克蛋白?分钟催化产生 1nmol 还原型?胞色素 C ? 1 个酶活 单位? NCR 酶活性 (nmol/min/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷?Cpr×V ??÷T = 529×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr (2)按照?本质??算 活性单位定义?37℃中，?克?品?分钟催化产生 1nmol 还原型?胞色素 C ? 1 个酶活单 位?NCR 酶活性(nmol/min/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总÷?W×V ?÷V ?总? ÷ T = 265×(△A 测定管-△A 空白管)÷W ε?还原型?胞色素 C 摩尔消光系数，19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm?d?比色皿光?， 1cm?V 反总?反应体系总体?，1010μL=0.00101L?Cpr?к清液蛋白质浓度，mg/mL，需 要另外测定?V ??加入反应体系中к清液体?，50μL=0.05mL?V ?总?加入提取液体?， 0.5mL?W??本质?，g?T?反应时间，2min? 注意?项? 试剂й?试剂四临用前配制，配好未使用完的 4℃可保存两天?
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