以下是大鼠胎儿表皮角质形成层细胞提取物说明书产品说明：

大鼠胎儿表皮角质形成层细胞提取物说明书【Rat Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes Derivatives】

大鼠胎儿表皮角质形成层细胞提取物是从大鼠原代胎儿表皮角质形成层细胞提取的，大鼠原代胎儿表皮角质形成层细胞从正常大鼠胚胎组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。        
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。        
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。        
潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4>Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
注意事项：
冻存细胞接收后大鼠胎儿表皮角质形成层细胞提取物说明书的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；

2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。

3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。

4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

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溴马秦标准品CAS:1808-12-4进口、国产规格：200mg

8-Bromotheophylline8-溴茶碱标准品CAS:10381-75-6进口、国产规格：400mg

BromperidolDecanoate溴哌利多癸酸酯标准品CAS:75067-66-2进口、国产规格：15mg

BrompheniramineMaleate马来酸溴苯那敏标准品CAS:980-71-2进口、国产规格：125mg

Budesonide布地奈德标准品CAS:51333-22-3进口、国产规格：200mg

Bumetanide布美他尼标准品CAS:28395-03-1进口、国产规格：250mg

布美他尼相关物质A标准品CAS:28328-53-2进口、国产规格：10mg
大鼠胎儿表皮角质形成层细胞提取物说明书基质金属蛋白酶20抗体 MMP-20

胃粘液素抗体 Mucin 5AC

尿调节蛋白抗体 Uromucoid

肌细胞增强因子2抗体 MEF2A

肌原调节蛋白抗体 MyoD1/Myf3

神经母细胞特异性转移因子抗体 MASH1

组织相关抗原HLA-B15抗体 MHC class I antigen B 15

蛋氨酸腺苷转移酶抗体 Methionine adenosyltransferase

磷酸化自噬微管相关蛋白轻链3抗体 phospho-MAP1LC3A(Ser12)

粘蛋白-5B抗体 MUC5B

磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶p38β抗体 phospho-MAPK11(Thr180+Tyr182)

粘蛋白-3抗体 mucin3
细胞培养方法：

1、大鼠胎儿表皮角质形成层细胞提取物说明书细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。