谷氨酸脱氢酶(GDH)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，

在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
测定原理：

GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。

通过测定 340nm 吸光度的下降速率，计算 GDH 活性。自备仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、

研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；
酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提

取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；

8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心?ō? 
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

（1）在试剂二中加入 10mL 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物

种）水浴 5min；现配现用（配好后 12h 内用完）；

（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL试剂二，混匀，立即记录340nm

处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。 
计算公式：
GDH 活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）中 GDH 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷V 样÷T=643×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(W×V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：
比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：
反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总
数，500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）中 GDH 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷V 样÷T=1286×ΔA
2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(V 样×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=1286×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=2.572×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：
96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：
反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总
数，500 万。

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