谷氨酸合成酶(GOGAT)测试盒紫外分光光度法

商品属性：

测定意义：

GOGAT 广泛分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的

调控。GOGAT 分为以 NADH 为还原剂的 NADH-GOGAT 和以铁氧还蛋白为还原剂的

Fd-GOGAT。Fd-GOGAT 主要存在于叶绿体基质中，与光合作用和光呼吸有关，主要同化

NO3-还原和光呼吸产生的 NH4+。

测定原理：

Fd-GOGAT 催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸，谷氨酸脱氢酶

催化谷氨酸的脱氢反应，同时产生 NADH，使 WST-8 显橙黄色，在 450 nm 下测定吸光值。自备仪器和用品:分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 6mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；

试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 5mL 蒸馏水溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；

试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 50mL 试剂六溶解待用，用不完的试剂分装后

-20℃保存；

试剂五：液体 6mL×1 瓶，4℃避光保存；

试剂六：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL

提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 
测定操作：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
在 EP 管中加入如下试剂
试剂名称（μL） 测定管 对照管
试剂一 100 100
试剂二 50 50
充分混匀，30℃保温 5min
样本 50 50
试剂三 50
水 50
充分混匀，30℃准确反应 30min，95℃水浴 5min 终止反应，冷却后 10000g 4℃离心 5min，
取上清液待测
3、 工作液配制
临用前按试剂四：试剂五= 900:100（μL）的比例配制工作液，用多少配多少。
4、 谷氨酸含量测定在 1mL 玻璃比色皿中加入如下试剂
试剂名称（μL） 测定管 对照管
上清液 100 100
工作液 900 900
混匀，25℃反应 30min，450nm 下测定吸光值 A 测定与对照，△A=A 测定-A 对照，每个测
定管设一个对照管。

计算公式：
Fd-GOGAT 活性计算：
标准曲线为 y = 4.4336x - 0.0005，R2 = 0.9996；其中 x 为标准品浓度 μmol/mL, y 为吸光值△A。
1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。
Fd-GOGAT（nmol/min/mg prot）=（ΔA+0.0005）÷ 4.4336×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T×1000
=37.6×（ΔA+0.0005）÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟产生 1 nmol 的谷氨酸定义为一个酶活力单位。
Fd-GOGAT（nmol/min/g 鲜重）=（ΔA+0.0005）÷ 4.4336×V 反总÷(W× V 样÷V 样总) ÷T×1000
=37.6×（ΔA+0.0005）÷W
V 反总：反应体系总体积，0.25mL；ε：V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取
液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
1000，μmol 到 nmol 的换算系数。

公司正在出售的产品：