多胺氧化酶(PAO)测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

多胺氧化酶是催化生物体内多胺氧化的关键酶，通过调节体内多胺水平和生成物的浓度，参与各种植物体对逆境胁迫的反应。
测定原理：

PAO 催化多胺氧化产生过氧化氢，在过氧化物酶存在的条件下与底物显色，在 550nm 下有

特征吸收峰，通过测定吸光值增加速率来反映 PAO 活性。自备仪器和用品:分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔
7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。

测定操作：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

试剂名称（μL） 测定管

试剂一 700

试剂二 100

试剂三 50

样本 100

试剂四 50

迅速混匀，于 550nm 下测定初始吸光值 A1 与 30min 后吸光值 A2。ΔA=A2-A1。
计算公式：
PAO 活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.002 为一个酶活力单位。
PAO（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.002 为一个酶活力单位。
PAO（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.002 为一个酶活力
单位。
PAO（U/104
cell）＝ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.002÷T =0.333×ΔA
（4）按液体体积计算
单位的定义：每 mL 液体样本在每 mL 反应体系中每分钟 A550 变化 0.002 为一个酶活力单
位。
PAO（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.002÷T =166.67×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1×10-3
L；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液
体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500 万。

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