谷氨酰胺酶(GLS)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

GLS（EC 3.5.1.1）是酰胺基水解酶，催化天冬酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重

要调控作用。
测定原理：

GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶

活性。自备仪器和用品:台式离心机、酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 60mL×2 瓶，4 ℃保存；

试剂二：粉剂×2 瓶，4 ℃避光保存；临用前每瓶加入 25mL 蒸馏水充分溶解待用，现配现

用；

试剂三：液体 60 mL×1 瓶，常温保存；

试剂四：液体 5 mL×1 瓶，常温保存；

试剂五：液体 3 mL×1 瓶，常温保存；

试剂六：液体3 mL×1瓶，常温避光保存。
酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试
剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。

测定操作：
1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm。
2、样品测定（在 EP 管中加入下列试剂）：
试剂名称（μL） 测定管 对照管
样本 25
蒸馏水 25
试剂一 100 100
试剂二 400 400
混匀，37℃水浴 1 小时
试剂三 525 525
混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，在 96 孔板中加入下列试剂
上清液 130 130
试剂四 30 30
试剂五 20 20
试剂六 20 20
混匀，室温静置 15min，420nm 处读取测定管和对照管吸光值，计算 ΔA=A 测定管-A 对照
管。对照管只要做一管。
注意：
1、试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
2、ΔA（A 测定管-A 对照管）若出现负值，可能是酶活性较低，可将反应时间 1h 延长到
2h，相应的在计算公式中除以 2。

计算公式：
标准条件下测定的回归方程为 y = 1.9244x + 0.0057，R2 = 0.9983；x 为标准品浓度（μmol/mL），
y 为吸光值 A。
1、血清（浆）GLS 活性
单位定义：每 mL 血清（浆）每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(nmol /min /mL)＝ (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V 反总÷V 样÷T×1000=363.7×(ΔA -0.0057)
2、组织、细菌或细胞 GLS 活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每 mg 蛋白质每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(nmol /min /mg prot)＝ (ΔA-0.0057) ÷1.9244×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×1000=363.7×(ΔA
-0.0057)÷Cpr。
（2）按样本鲜重计算：
单位定义：每 g 组织每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(nmol/min /g 鲜重)＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×1000=363.7×(ΔA
-0.0057)÷W。
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每 1 万个细菌或细胞每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
GLS(nmol/min/104 cell) ＝ (ΔA-0.0057)÷1.9244×V 反 总 ÷(500×V 样 ÷V 样 总 ) ÷T ×1000
=0.7274×(ΔA -0.0057)
V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，60min；V 反总：反应体系总体积，1.05mL；
V 样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，
g；500：细菌或细胞总数，500 万; 1000，μmol 到 nmol 换算系数。

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