果胶酶测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖 醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、 医药、纺织及日化用品行业。
测定原理：

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。 自备实验用品及仪器 天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；临用前加入 12.5mL 试剂一，50℃加热溶解，用不完的试剂 4℃保存一周。 试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
 1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。 3. 细胞培养液等：直接检测。
测定操作：
 对照管 测定管 试剂二（μL） 400 400 50℃水浴温育 5min 样本（μL） 100 煮沸样本（μL） 100 混匀，50℃水浴反应 30min 试剂三（μL） 500 500 沸水浴 5min，冰浴冷却终止反应，8000g，4℃，离心 10min，取上清，蒸 馏水调零，1mL 玻璃比色皿测定 540nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A 对 照管。每个测定管需设一个对照管。
计算公式：
 标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R 2 = 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。 1．按照蛋白浓度计算 酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为 一个酶活力单位。 果胶酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T = 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2．按照样本质量计算 酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每克样本每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为一 个酶活力单位。 果胶酶活性（mg/h /g 鲜重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T = 2.523×(ΔA+0.008)÷W 3. 按细胞数量计算 酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每 104细胞每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸为 一个酶活力单位。 果胶酶活性（mg/h /104 cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T = 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量 4．细胞培养液 酶活性定义：在 50℃，pH3.5 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生 1mg 半乳糖醛酸 为一个酶活力单位。 果胶酶活性（mg/h /mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×(ΔA+0.008) V 反总：反应总体积，0.5mL；V 样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h 注意事项 1. 试剂二若有沉淀析出，请置于 50℃加热溶解。 2. 测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样 本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。 3. 煮沸样本建议在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶 灭活。
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