尿酸(UA)含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

UA 是鸟类和爬行类动物的主要代谢产物，正常人体尿液中产物主要为尿素，含少量尿酸。 此外，UA 还是重要的抗氧化剂，能清除超氧化物，羟自由基等。
测定原理：

尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素，CO2及 H2O2，H2O2 氧化亚铁氰化钾中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ， Fe3+进一步与酚和 4-氨基安替比林缩合生成红色醌类化合物，在 505nm 下有特征吸收峰， 测定反应体系 505nm 的吸收值，可计算尿酸的含量。 自备实验用品及仪器： 恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：

缓冲液：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一： A：用于标准管和测定管，粉剂 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 13mL 缓冲液溶解。 B：用于空白管，粉剂 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 7 mL 缓冲液溶解。 试剂二：粉剂 1 管，4℃避光保存，使用前加 2mL 蒸馏水溶解，60℃加热溶解。
样品的制备：
1. 动植物组织：建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 生理盐水或蒸馏水，进行冰浴匀浆，然 后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2. 血清，培养液：直接检测。
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm。 2、 操作表 标准管 空白管 测定管 试剂一（μL） A, 60 B, 60 A, 60 H2O（μL） 180 240 180 试剂二（μL） 60 样品（μL） 60 混匀，37℃水浴 30min，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，测定 505nm 处各管吸光值， 标准管和空白管只需做一管。
计算公式：
1. 组织： （1）按样本重量计算 尿酸含量（μmol/g 鲜重）=C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷（W÷V 样总）=0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷W （2）按样本蛋白浓度计算 尿酸含量（μmol/mg prot）=C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷Cpr =0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷Cpr 尿酸（μmol/L）= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）×103 =500×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管） C 标：标准品浓度 0.5μmol/mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL；103 ：1μmol/ L=103μmol/ mL 注意事项： 1. 血清样本请在 24 小时内测定，或者 4℃密封避光保存不超过 72 小时。 2. 吸光值大于 0.8 可用蒸馏水稀释样本，并在计算公式中算入稀释倍数。 3. 检出限为 10μmol/L。
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