胼胝质含量测试盒荧光法

商品属性：

测定意义：

胼胝质（callose）是围绕每个筛孔的边缘积累的碳水化合物，是一种以 β-1,3 键结合的葡聚 糖，在植物的筛管代谢、配子体发育等生命活动中发挥着重要的作用，其合成、分解直 接关系植物正常的生长代谢过程。
测定原理：

胼胝质与苯胺蓝染料反应，产生荧光物质，在激发波长 400nm，发射波长 500nm 下荧光强 度。 自备仪器和用品： 研钵、冰、低温离心机、荧光酶标仪、黑色 96 孔板、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存；临用前加入 10mL 蒸馏水充分溶解待用。 试剂二：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 标准品：粉剂×1 管，4℃保存。
样品中胼胝质提取：
切取约 0.1g 样本于 EP 管（ 不要研磨），用 98%的乙醇浸泡过夜。然后弃掉乙醇，加入 1mL 提取液，充分匀浆，80℃水浴 20min，10000g 25℃离心 10min，取上清待测。
测定操作：
标准品溶液配制 在标准品中加入 1mL 提取液，充分溶解,得到浓度为 10mg/mL 的胼胝质标准溶液。按以下 比例配制成不同浓度的标准品。 标准品浓度（mg/mL） 10 8 6 4 2 标准品（μL） 200 160 120 80 40 提取液（μL） 0 40 80 120 160 样本测定 在 EP 管中依次加入如下试剂 试剂名称（μL） 测定管 样本上清或标准品溶液 40 试剂一 80 试剂二 40 充分震荡混匀 试剂三 120 充分混匀，50℃水浴 30min，然后室温放置 1h，直至溶液蓝色褪去。如果蓝色仍未褪去， 可以继续 50℃水浴直至蓝色消失。 取 200μL 于黑色 96 孔板，激发波长 400nm，发射波长 500nm，测定荧光强度，记作 A。
计算公式：
1. 标准曲线 以标准品浓度 mg/mL 为横坐标，荧光强度为纵坐标，制作标准曲线。 本试剂盒胼胝质标准曲线参考 2. 胼胝质含量计算 根据标准曲线得到样本上清中胼胝质的浓度（mg/mL) 样品中胼胝质含量（mg/g 鲜重）=样本上清中胼胝质的浓度（mg/mL) ÷（样本质量(g)÷提取 液体积（mL））=样本上清中胼胝质的浓度（mg/mL) ÷0.1
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