脲酶(UE)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

UE 能够水解尿素，产生氨和碳酸。UE 活性与有机物质含量、全氮和 氮含量呈正相关， 反应了氮素状况。
测定原理：

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸 馏水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1 瓶，临用前加入 9mL 蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂 4℃ 保存； 试剂二：液体 22mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三 A 液：液体×1 支，4℃保存；试剂三 B 液：液体×1 瓶，4℃保存；临用前将 A 液倒 入 B 液中混合，待用；用不完的试剂 4℃保存一周； 试剂四：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；
样本的前处理：
 1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。 
测定操作：
 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 578nm，蒸馏水调零。 2、酶促反应 试剂名称 测定管 对照管 样本（μL） 20 20 试剂一（μL） 90 蒸馏水（μL） 90 试剂二（μL） 190 190 混匀，放入 37℃水浴 1h 后，10000g 25℃离心 10min，取上清液。 2、将上清液稀释 10 倍（取 0.1mL 上清液，加入 0.9mL 蒸馏水）。 3、测氨量（在微量石英比色皿或 96 孔板中加入下列试剂） 测定管 对照管 稀释后的上清液（μL） 80 80 试剂三（μL） 15 15试剂四（μL） 15 15 充分混匀，室温放置 20min 蒸馏水（μL） 90 90 混匀，于 578nm 处，蒸馏水调零，读吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管 设一个对照管。
计算公式：
 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0915x +0.0373；x 为标准品浓度（μg/mL），y 为吸光值 A。 1、血清（浆）UE 活力的计算: 单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 UE 活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷V 样÷T=27.32×(ΔA -0.0373) 2、组织、细菌或细胞中 1μg NH3-N 活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr （2）按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 UE活力（μg/min/ g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W （3）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 UE活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0546×ΔA 10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V 反总：反应体系总体积：0.3mL；V 样：加入反 应体系中样本体积，0.02mL；V 样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500 万。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 0.04575x +0.0373；x 为标准品浓度（μg/mL），y 为吸光值 A。 1、血清（浆）UE 活力的计算: 单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 UE 活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷V 样÷T=54.64×(ΔA -0.0373) 2、组织、细菌或细胞中 1μg NH3-N 活力的计算: （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 UE 活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷Cpr （2）按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。 UE 活力（μg/min/g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷W （3）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。UE 活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.1092×ΔA 10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V 反总：反应体系总体积：0.3mL；V 样：加入反 应体系中样本体积，0.02mL；V 样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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