葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生 H2O2， 是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
测定原理：

GOD 催化产生 H2O2，过氧化物酶催化 H2O2氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物， 在 500 nm 有特征吸收峰，颜色深浅与 GOD 活性成线性关系。 试验中所需的仪器和设备 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰、蒸馏水
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 缓冲液：液体 30mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 10mL 缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存一个月； 试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 10mL 缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存一个月；
样品测定的准备 ：
 1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。
测定操作：
 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。 2、 试剂一和试剂二的配制：参见试剂的组成和配制。 3、煮沸样本的准备：取 200μL 样本至新的 EP 管中，95℃水浴 10min，冷却至室温后，8000g 4℃离心 10min，取上清作为对照管的煮沸样本待测。 4、测定操作表 试剂（μL） 对照管 测定管 样本 50 煮沸样本 50 试剂一 75 75 试剂二 75 75 混匀，35'C 保温 15min 后，于 500nm 波长处读取吸光度。ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测 定管需设一个对照管。
计算公式：
 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 回归方程为 y = 2.8348x - 0.0169；x 为 H2O2标准品浓度（μmol/mL），y 为ΔA。 1、血清（浆）GOD 活力的计算 单位定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷V 样÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169) 2、细菌、细胞或组织 GOD 活力的计算 （1）按蛋白浓度计算 单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(V 样×Cpr) ×1000÷T =58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr （2）按样本鲜重计算 单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ×1000÷T =58.8×(ΔA+0.0169)÷W （3）按细菌或细胞密度计算 单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ×1000÷T =0.118×(ΔA+0.0169) V 反总：反应体系总体积，0.125mL； V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取 液体积，1 mL；T：反应时间，15 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 回归方程为 y = 1.4174x - 0.0169；x 为 H2O2标准品浓度（μmol/mL），y 为ΔA。 1、血清（浆）GOD 活力的计算 单位定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反总÷V 样÷T×1000=118×(ΔA+0.0169) 2、细菌、细胞或组织 GOD 活力的计算 （1）按蛋白浓度计算 单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反总÷(V 样×Cpr) ×1000÷T =118×(ΔA+0.0169)÷Cpr （2）按样本鲜重计算 单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ×1000÷T =118×(ΔA+0.0169)÷W （3）按细菌或细胞密度计算 单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol H2O2为一个酶活力单位。 GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反总÷(500×V 样÷V 样总) ×1000÷T =0.235×(ΔA+0.0169) V 反总：反应体系总体积，0.125mL； V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取 液体积，1 mL；T：反应时间，15 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。
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