产地 | 国产 |
品牌 | 谷研 |
货号 | GOY-SH216-B |
用途 | 仅供科研实验 |
英文名称 | |
包装规格 | 50管/48样 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
别名 | 海藻糖含量测试盒 |
分子式 | |
是否进口 | 否 |
海藻糖含量测试盒可见分光光度法
商品属性:
检测方法 |
规格 |
货号 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
GOY-SH216-B |
测定意义:
海藻糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。由于海藻糖具有独特的不同于其他碳
水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下
保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定原理:
蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸(不允许快递)
和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 50ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存;
酶液提取:
1、细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104
个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),
超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30 次),室
温静置 45min,振荡 3~5 次,冷却后,8000g,25℃离心 10min,取上清。
2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g
组织,加入 1mL 提取液),冰浴匀浆,室温静置 45min,振荡 3~5 次,冷却后,8000g,25℃
离心 10min,取上清。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建
议取 0.1mL 血清(浆)加入 1mL 提取液),冰浴匀浆,室温静置 45min,振荡 3~5 次,冷却
后,8000g,25℃离心 10min,取上清。
测定操作:
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、 调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制:临用前在试剂一中加入 7.5mL 蒸馏水后,缓慢加入 42.5mL 浓硫酸,不
断搅拌,充分溶解,待用;用不完的试剂 4℃保存一周;
4、样本测定:取 0.25mL 样本和 1mL 工作液至 EP 管中,95 度水浴 10 min(盖紧,防止水
分散失),自然冷却至室温,在 620 nm 波长下记录测定吸光度值 A。
注意:由于工作液具有强腐蚀性,请谨慎操作。
若吸光值大于1,请将样本用提取液稀释后再测定,计算公式中乘以相应的稀释倍数。
计算公式:
1、标准条件下测定回归方程为 y = 8.8976x+0.0729;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
海藻糖含量(mg/g 鲜重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
海藻糖含量(mg/mg prot)=[ V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按细菌或细胞密度计算:
海藻糖含量(μg/104
cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A
-0.0729)
5、血清(浆)海藻糖含量计算
海藻糖含量(mg/mL)=[V1×(A -0.0729)÷8.8976 )]÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729)
1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.25 mL;V2:加入提取液总
体积 1mL;V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质
量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
注意: 检测限为 10μg/g 鲜重或 0.1μg/ mg prot
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