滤纸酶测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系，能水解纤维素 β-1,4 葡萄糖苷键生成葡萄糖，研 究滤纸酶活力对纤维素酶的研究?有非常重要的意义?
测定原理：

滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能о 3,5-?硝?水杨酸生成红棕色氨?化合物，在 540nm 处 有 ?吸收，在一定范围内反?液颜色深?о还原糖的?成正比，可测定?算得滤纸酶的 活力? 自备实验用品及仪器 天??研钵??温离心机?可见分??度?/酶标仪?微?石英比色皿/96 孔板?恒温水浴锅? 
试剂组成和配制：

试剂一?液体 25mL×1 瓶，4℃保存? 试剂??液体 40mL×1 瓶，4℃保存? 滤纸条?50mg×50 条?
酶液提取：
 1. 组??按照质??g??蒸馏水体?(mL)为 1?5~10 的比例?建议?取约 0.1g，?入 1mL 蒸馏水??入蒸馏水，冰浴匀?后于 4℃，12000rpm 离心 10min，取к清置于冰к待测? 2. ?胞?按照?胞数??104 个??蒸馏水体??mL?为 500~1000?1 的比例?建议 500 万?胞?入 1mL 提取液?，冰浴超声波破碎?胞??率 300w，超声 3 。，间隔 7 。， 总时间 3min??然后 4℃，12000rpm 离心 10min，取к清置于冰к待测? 3. ?养液或?它液体?直接检测?
测定操作：
 1. 根据样本数?取两倍数?的滤纸条和 Ep 管，?支 Ep 管中放入一个卷状滤纸条?注意要 放入?部?，作为?物? 2. 对照管?取 200μL 灭活的酶液，?入 500μL 试剂一，充分混匀，再?入放有滤纸条的 Ep 管中，标注为对照管? 3. 测定管?取 200μL 酶液，?入 500μL 试剂一，充分混匀，再?入放有滤纸条的 Ep 管中， 标注为测定管? 4. 对照管和测定管同时置于 50℃水浴锅中反? 30min? 5. ?入 800μL 试剂?，沸水浴 5min，自来水冷却后取 200μL 于微?石英比色皿/96 孔板中 测定 540nm 处吸?值，分别记为 A 对照管和 A 测定管，△A= A 测定管- A 对照管? 
计算公式：
 a. 用微?石英比色皿测定的?算公式如л 标准曲线?y = 0.2805x - 0.0255，R 2 = 0.9991 ?1?按照蛋白浓度?算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，?毫克蛋白?分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的 酶?为一个酶活力单?? FPA?U/mg prot?=?△A+0.0255?÷ 0.2805×V 反总÷?V 样×Cpr?÷T = 0.891×?△A+0.0255?÷ Cpr ?2?按照样本质??算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，?克组??分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶 ?为一个酶活力单??FPA?U/g?=?△A+0.0255?÷ 0.2805×V 反总÷?W×V 样÷V 样总?÷T = 0.891×?△A+0.0255?÷ W ?3?按液体体??算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，?毫升?养液?分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需 的酶?为一个酶活力单?? FPA?U/mL?=?△A+0.0255?÷ 0.2805×V 反总÷V 样÷T = 0.891×?△A+0.0255? ?4?按?胞数??算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，? 104个?胞?分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需 的酶?为一个酶活力单?? FPA?U/104 cell?=?△A+0.0255?÷ 0.2805×V 反总÷?V 样×?胞数??万个?÷V 样总?÷T = 0.891×?△A+0.0255?÷ ?胞数??万个? V 反总?反?总体?，1.5mL，V 样?反?体系中?入样本体?，0.2mL?V 样总??入提 取液体?，1mL?Cpr?样本蛋白浓度，mg/mL?W?样本质?，g?T?反?时间，30min b. 用 96 孔板测定的?算公式如л 标准曲线?y = 0.1403x - 0.0255，R 2 = 0.9991 ?1?按照蛋白浓度?算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，?毫克蛋白?分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的 酶?为一个酶活力单?? FPA?U/mg prot?=?△A+0.0255?÷ 0.1403×V 反总÷?V 样×Cpr?÷T =1.782×?△A+0.0255?÷ Cpr ?2?按照样本质??算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，?克组??分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需的酶 ?为一个酶活力单?? FPA?U/g?=?△A+0.0255?÷ 0.1403×V 反总÷?W×V 样÷V 样总?÷T = 1.782×?△A+0.0255?÷ W ?3?按液体体??算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，?毫升?养液?分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需 的酶?为一个酶活力单?? FPA?U/mL?=?△A+0.0255?÷ 0.1403×V 反总÷V 样÷T = 1.782×?△A+0.0255? ?4?按?胞数??算 酶活性定义?在 50℃，pH4.6 条件л，? 104个?胞?分钟分解滤纸产生 1mg 葡萄糖所需 的酶?为一个酶活力单?? FPA?U/104 cell?=?△A+0.0255?÷ 0.1403×V 反总÷?V 样×?胞数??万个?÷V 样总?÷T = 1.782×?△A+0.0255?÷ ?胞数??万个? V 反总?反?总体?，1.5mL，V 样?反?体系中?入样本体?，0.2mL?V 样总??入提 取液体?，1mL?Cpr?样本蛋白浓度，mg/mL?W?样本质?，g?T?反?时间，30min 注意?项 1. 用?净的镊子取出滤纸条，带手套卷成卷放入 Ep 管?部? 2. 样本灭活时保证同一批样本处理时间一致，建议沸水浴十分钟? 3. 批?样本测定之前?做 1-2 个样本的预实验，若吸?值超过 1.2，建议将样本用蒸馏水稀 释后再进行测定，?算公式中乘以稀释倍数?4. 显色后取检测液时注意枪头н要碰到滤纸条，以免带入毛状物，影响测定结果?
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