赖氨酸(LYS)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

赖氨酸是人体必需氨基酸之一，赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中 易被破坏而缺乏，故称为 限制性氨基酸。
测定原理：

蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的 ε-NH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的 深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅 有—个游离氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制标准液。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、 蒸馏水、水浴锅。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 12.5mL 试剂三充分溶解混匀； 试剂二：液体 12.5mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：60%乙醇，自备。
酶液提取：
样本烘干粉碎，称取约 0.01g 样本，加入 1mL 提取液，充分匀浆。80℃水浴提取 20min，冷 却后 10000g 离心 10min，取上清待测。
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 530nm，蒸馏水调零。 2、 工作液的配制：取 10mL 试剂一与 10mL 试剂二混合摇匀，取上清备用。用不完的试剂 4℃保存。 3、 在有盖 EP 管中加入下列试剂： 试剂名称（μL） 测定管 空白管 样本 100 提取液 100 工作液 200 200 混匀，80℃水浴 30min（盖紧，以防止水分散失），冷却至常温。 试剂四 300 300 混匀，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 530nm 波长处记录吸光值 A。△A=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。
计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准条件下测定回归方程为 y = 0.0062x - 0.0212；x 为亮氨酸含量（μg/mL），y 为吸光值。 1.按照蛋白浓度计算 赖氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515 =185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr 2.按照样本质量计算 赖氨酸含量(μg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515 =185.73×(△A+0.0212) ÷W V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓 度，mg/mL；W：样本质量，g；1.1515，校正系数。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 标准条件下测定回归方程为 y = 0.0031x - 0.0212；x 为亮氨酸含量（μg/mL），y 为吸光值。 1.按照蛋白浓度计算 赖氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515 =371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr 2.按照样本质量计算 赖氨酸含量(μg/g 干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515 =371.45×(△A+0.0212) ÷W V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓 度，mg/mL；W：样本质量，g；1.1515，校正系数。
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