产地 | 国产 |
品牌 | 谷研 |
货号 | GOY-SH238 |
用途 | 仅供科研实验 |
英文名称 | TAL |
包装规格 | 100管/48样 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
别名 | 酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒 |
分子式 | |
是否进口 | 否 |
酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒微量法
商品属性:
检测方法 |
规格 |
货号 |
微量法 |
100管/48样 |
GOY-SH238 |
测定意义:
TAL 广泛存在于植物和微生物中,是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL 能够跃过肉桂
酸-4-羟基化酶(C4H)直接将酪氨酸转化为香豆酸,香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮
素等具有抗氧化的苯丙素类天然产物。
测定原理:
TAL 能够分解酪氨酸产生香豆酸,使反应溶液 333nm 下的吸光度随反应时间而上升,根据
吸光度的变化率可计算出 TAL 活性。
需自备的仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板(UV 板)、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)果汁等液体样品:直接检测。
测定操作:
1、 酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 333nm。
2、 准备 96 孔 UV 板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,
检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板)。
3、 试剂二的配置:临用前在试剂二瓶中加入 10mL 试剂一充分溶解待用(用不完的试剂 4℃
保存一周,注意现配现用),在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
4、在 EP 管中依次加入如下试剂
试剂名称(μL) 测定管 对照管
样本上清 40 40
试剂一 360
试剂二 360
充分混匀,40℃保温 60min
试剂三 20 20
混匀,10000g 4℃离心 5min,取 200μL 上清至 96 孔 UV 板,333nm 下测定吸光值 A 测定与
A 对照,ΔA=A 测定-A 对照
计算公式:
1、血清(浆)或果汁 TAL 活性
单位的定义:每分钟每 mL 血清(浆)或果汁在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化
0.005 为一个酶活力单位。
TAL(U/mL)=ΔA×V 反总÷( V 样÷V 样总)÷0.005÷T =35×ΔA
2、组织、细菌或细胞 TAL 活性
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.005 为一个
酶活力单位。
TAL(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷(V 样×Cpr)÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
(2)按样本鲜重计算:
单位定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.005 为一个
酶活力单位。
TAL(U/g 鲜重)=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.005÷T =35×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位定义:每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 333nm 处吸光值变化 0.005 为
一个酶活力单位。
TAL(U/104 cell)=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.005÷T =0.07×ΔA
V 反总:反应体系总体积,0.42mL;V 样:加入样本体积,0.04mL;V 样总:加入提取液
体积,1 mL;T:反应时间,60 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;
500:细胞或细菌总数,500 万。
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