产地 | 国产 |
品牌 | 谷研 |
货号 | GOY-SH234-B |
用途 | 仅供科研实验 |
英文名称 | |
包装规格 | 50管/48样 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
别名 | 考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒 |
分子式 | |
是否进口 | 否 |
考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒可见分光光度法
商品属性:
检测方法 |
规格 |
货号 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
GOY-SH234-B |
测定意义:
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分
析。
测定原理:
在酸性溶液中,考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物;该复合物在 620nm 处有
吸收峰, 其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高,适合微量蛋白质分
析。
自备仪器和用品:
离心机、分光光度计、石英比色皿、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 30 mL×1 瓶,4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取:
1. 液体样品:澄清液体样品可以直接测定。
2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:20 的比例(建议称取约 0.05 g 组
织,加入 1mL 提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水))
冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即待测液。(动物样品常常需要稀释)
3. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建
议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7
秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min,蒸馏水调零。
2. 在石英比色皿中加入:
试剂(μL) 测定管 空白管
样本 500
蒸馏水 500
试剂一 500 500
混匀后,测定波长 620 nm 吸光值,△A=A 测定-A 空白。
注意:
1、 空白管只需要测定一次。
2、 测定管的待测样品蛋白质浓度要控制在 1-100μg/mL 范围内,尽量控制在中间范围。
3、 测定管若出现浑浊或分层现象,就说明蛋白含量较高,通常须将待测液用提取液稀释
10~20 倍后重新检测。
计算公式:
标准曲线:y = 14.253x - 0.0007;R2 = 0.9997;x: 蛋白标准品浓度(mg/mL;线性范围
为 0.001~0.1mg/mL); y: 吸光值差值
1.按液体样本体积计算:Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷14.253
=0.07×(△A+0.0007)
2.按组织样本质量计算:Cpr(mg/g 鲜重)=(△A+0.0007)÷14.253×V 总÷W
=0.07×(△A+0.0007)÷W
V 总:提取液体积,1 mL; W:样本质量,g。
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