木质素过氧化物酶(LiP)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系， 在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具 有较大的应用潜力。
测定原理：

木质素过氧化物酶催化天青脱甲基，在 651nm 处测定吸光值减少。 自备实验用品及仪器 天平、研钵、低温离心机、酶标仪、96 孔板、可调式移液器、冰。
试剂组成和配制：

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 115mL 蒸馏水，充分溶解待用，用不完的试剂 4℃ 保存一个月。 试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体 5mL×1 支，4℃保存。
酶液提取：
 1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。 2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置于冰上待测。 3. 培养液或其它液体：直接检测。 
测定操作：
 1、酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 651nm。 2、临用前按每个样本试剂一：试剂二：试剂三=80:40:40（μL）的比例配制工作液，现配现 用。 3、在 96 孔板中依次加入如下试剂 测定管 样品（μL） 40 工作液（μL） 160 充分混匀，立即测定651nm处10s和130s吸光值，记为A1和A2，△A=A1- A2 
计算公式：
 1．按照蛋白浓度计算 酶活性定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。 LiP 活性（U/mg prot）= ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr 2．按照样本质量计算 酶活性定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单位。 LiP 活性（U/g 鲜重）=ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.01÷T =250×ΔA÷W 3．按照细胞数量计算酶活性定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力 单位。 LiP 活性（U/104 cell）=ΔA×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷0.01÷T=0.5×ΔA 4．按照液体体积计算 酶活性定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每分钟 A651 变化 0.01 为一个酶活力单 位。 LiP 活性（U/mL）=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =250×ΔA V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min
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