免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

参数规格：

抗体的生活习性：

(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。

(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。

(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在 上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

实验步骤:

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② PathScan® Phospho-ALK (Tyr1604) Chemiluminescent Sandwich ELISA Kit滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

抗体的多样性：

抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。

因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位（抗原结合簇），所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面，抗体本身是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性，它们表现出不同的血清学类型。
滑膜细胞p42 MAP Kinase (Erk2) Antibody

骨骼肌细胞Pannexin-1 (D9M1C) Rabbit mAb

软骨细胞Phospho-cdc2 (Thr161) Antibody

破骨细胞Blimp-1/PRDI-BF1 (C14A4) Rabbit mAb

成骨细胞Maspin (T50) Antibody

神经元细胞MARK2 Antibody

神经胶质细胞Maspin (L250) Antibody

海马神经元细胞MEK1 Antibody

脑成纤维细胞MEK2 Antibody

神经小胶质细胞MEK1/2 (47E6) Rabbit mAb

雪旺氏细胞Phospho-MEK1 (Thr286) Antibody

脑膜细胞Phospho-MEK1 (Ser298) Antibody

脑动脉内皮细胞hnRNP C1/C2 (D6S3N) Rabbit mAb

脑动脉平滑肌细胞PTMScan® Phospho-Thr-X-Arg Motif [pT(P/X)R] Kit
PathScan® Phospho-ALK (Tyr1604) Chemiluminescent Sandwich ELISA Kitethyl 2-[(chloroacetyl)amino]-4-m肠沙门氏菌亚种

2-mercapto-1-propyl-1H-benzimidazole-5-sulfonamide产朊假丝酵母

4-chloro-3-[(2,6-dimethylmorpholin-4-yl)sulfonyl]benzoic acidIFO 0612

2-(4-acetylphenoxy)-N,N-dimethylacetamideATCC -VR-530AS/GT™

3-ethoxy-4-(2-oxo-2-piperidin-1-ylethoxy)benzoic acid1/33 拉氏普罗威登斯菌

{[5-(4-fluorophenyl)-4-phenyl-4H-1,2,4-triazol-3-yl]thio}acetic acidEA-1

2-chloro-N-[(2Z)-3-(2,4-dichlorobenzyl)-1,3-thiazol-2(3H)-ylidene]acetamideMH72

3-Benzylsulfamoyl-benzoic acid2CP-C

({[4-(methylamino)-3-nitrophenyl]sulfonyl}amino)acetic acidY(2)BUL

3-{5-[(dimethylamino)sulfonyl]-1-methyl-1H-benzimidazol-2-yl}propanoic acidATCC -50514™

3-amino-4-(butylamino)-N,N-dimethylbenzenesulfonamide大肠杆菌噬菌体E1

2-(2-ethoxy-4-formylphenoxy)-N,N-dimethylpropanamideATCC -VR-466™

2-(chloromethyl)-N,N-diethyl-5-mLJ211 肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型