免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

参数规格：

抗体的生活习性：

(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。

(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。

(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在 上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

实验步骤:

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② α-Adducin (D7T7R) Rabbit mAb滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

抗体的多样性：

抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。

因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位（抗原结合簇），所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面，抗体本身是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性，它们表现出不同的血清学类型。
肾系膜细胞RBL1 (D3P3C) Rabbit mAb

肾成纤维细胞SimpleChIP® Mouse PITX3 Intron 1 Primers

膀胱上皮细胞SimpleChIP® Mouse MYT-1 Promoter Primers

膀胱平滑肌细胞NCAM-L1 (D5N9S) Rabbit mAb

膀胱成纤维细胞SimpleChIP® Mouse GAPDH Intron 2 Primers

肾动脉内皮细胞DDX6/RCK (D26C11) Rabbit mAb

肾动脉平滑肌细胞FastScan™ Phospho-EGF Receptor (Tyr1068) ELISA Kit

上皮细胞C/EBPα (D56F10) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)

成纤维细胞Phospho-SAMHD1 (Thr592) (D7O2M) Rabbit mAb

输尿管上皮细胞IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen) (Alexa Fluor® 647 Conjugate)

尿道上皮细胞ER Stress-induced Autophagy Antibody Sampler Kit

气管上皮细胞EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (PE Conjugate)

气管平滑肌细胞Huntingtin Interaction Antibody Sampler Kit

上皮细胞CD38 (HIT2) Mouse mAb (FITC Conjugate)
α-Adducin (D7T7R) Rabbit mAb3-(4-chlorophenyl)propanoic acid灰色链霉菌

N,N-dimethylthiourea藤黄微球菌

4-[(2,2-dimethylpropanoyl)amino]butanoic acid坏死梭杆菌坏死亚种

4-[[(4-fluorophenyl)sulfonyl](methyl)amino]butanoic acid谷氨棒状杆菌

2-chloro-N-cyclohex-1-en-1-yl-N-(2-furylmethyl)acetamide威尔酵母

3-[(isopropylamino)sulfonyl]-4-methoxybenzoic acid成团泛菌

N,4-二基苄胺米根霉

4-(2-furyl)butan-2-one大肠埃希菌

1-[5-(2-nitrophenyl)thien-2-yl]ethanone近平滑假丝酵母

1-(chloroacetyl)-4-(3-chlorophenyl)piperazine hydrochloride熏衣草灰链霉菌

2-oxo-1,2,3,4-tetrahydroquinoline-6-carboxylic acid立枯多核菌

N-methylthiophene-2-carboximidoyl chloride猫葡萄球菌

2-Chloro-1,2-di-p-tolyl-ethanone蚀脉镰孢霉