免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

参数规格：

抗体的生活习性：

(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。

(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。

(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在 上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

实验步骤:

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② UBE2N (D2A1) Rabbit mAb滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

抗体的多样性：

抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。

因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位（抗原结合簇），所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面，抗体本身是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性，它们表现出不同的血清学类型。
SK-MEL-1, 人皮肤细胞Phospho-c-Fos (Ser32) (D82C12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

A549, 人细胞系Mono-Methyl Arginine (R*GG) (D5A12) Rabbit mAb

SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐药细胞株Phospho-PLCγ1 (Ser1248) (D25A9) Rabbit mAb

A-375 [A375], 人恶性黑素瘤细胞株Phospho-Btk (Tyr223) (D9T6H) Rabbit mAb

A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株Presenilin 1 (E3L9X) Rabbit mAb

SP2/0, 小鼠细胞SMC2 (D11F9) Rabbit mAb

WM35, 人细胞UBE2L3 (D5G1) Rabbit mAb

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株NKCC2 (D5Q1H) Rabbit mAb (IF Formulated)

U-2 OS, 人细胞CD44 (156-3C11) Mouse mAb (PE Conjugate)

WM451, 人细胞SPARC (D10F10) Rabbit mAb

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人细胞Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Magnetic Bead Conjugate)

C6, 大鼠脑细胞Phospho-AS160 (Ser588) (D8E4) Rabbit mAb

UM-UC-3, 人膀胱移行细胞癌CISH (D4D9) Rabbit mAb

Hela, 人细胞系Phospho-CK2 Substrate [(pS/pT)DXE] MultiMab™ Rabbit mAb mix
UBE2N (D2A1) Rabbit mAb5-己炔凝结芽孢杆菌

1,2-二溴-3-氟苯圆酵毛壳

2-(氯基)-4,4,5,5-四基-1,3,2-二氧杂马里斯棒状杆菌

2-溴-4-氯苯胺洛格酵母

3,4-二氧基苯酚耐硼赖氨芽孢杆菌

苯酚, 4-炔基-酿酒酵母

4-环基哌啶盐盐黑曲霉

左炔诺孕酮亚黄八叠球菌

炔诺酮Paucimonas lemoignei

对羟基苯酯恶臭假单胞菌

D-氨酰胺盐盐香菇*

4-(氯基)苯基醇长根菇

基奎宁环-4-羧酯台湾根霉