免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

参数规格：

抗体的生活习性：

(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。

(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。

(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在 上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

实验步骤:

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb (HRP Conjugate)滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

抗体的多样性：

抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。

因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位（抗原结合簇），所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面，抗体本身是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性，它们表现出不同的血清学类型。
兔视网膜色素上皮细胞PhosphoPlus® CREB (Ser133) Antibody Duet

兔视网膜微内皮细胞PhosphoPlus® GSK-3β (Ser9) Antibody Duet

兔输卵管平滑肌细胞PhosphoPlus® NF-κB p65/RelA (Ser536) Antibody Duet

兔输卵管上皮细胞PhosphoPlus® Stat5 (Tyr694) Antibody Duet

兔输尿管平滑肌细胞PhosphoPlus® Notch1 (Cleaved

兔输尿管上皮细胞PhosphoPlus® Stat1 (Tyr701) Antibody Duet

兔髓核细胞PhosphoPlus® Met (Tyr1234/Tyr1235) Antibody Duet

兔外根鞘细胞PhosphoPlus® IκBα (Ser32/Ser36) Antibody Duet

兔胃成纤维细胞HO-1 (E6Z5G) Rabbit mAb

兔胃黏膜上皮细胞PhosphoPlus® c-Jun (Ser63) Antibody Duet

兔胃平滑肌细胞PhosphoPlus® c-Jun (Ser73) Antibody Duet

兔纤维环细胞PhosphoPlus® Bad (Ser112) Antibody Duet

兔小肠成纤维细胞Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)

兔小肠平滑肌细胞PhosphoPlus® Jak2 (Tyr1007/Tyr1008) Antibody Duet
Nucleolin (D4C7O) Rabbit mAb (HRP Conjugate)4-溴-1-萘腈Human CD14

3-溴-4-氯啶Human CD4

左布比卡因Human CD3

6-氯-2-基啶Human FOXP3

2,3-二基醌Human CD16

(R)-2-氨基酯盐盐Mouse CD45

对氨基苯腈Mouse CD4

十六酰胺醇Mouse CD8a

2,6-二溴-4-氧基啶Mouse CD3

2-基咪唑-4-醛Mouse F4/80

富马福莫特罗Mouse CD25

(R)-3-((叔氧基羰基)氨基)-5-基己Mouse/Human CD44

[6--2-基-1-[2-(4-吗啉基)基]-1H-吲哚-3-基](4-氧基苯基)酮Mouse/Human CD11b