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产地 | 进口/国产 |
品牌 | 上海谷研 |
货号 | ?GOY-P2017 |
用途 | |
包装规格 | |
纯度 | % |
CAS编号 | |
是否进口 |
技术特点:
1柱式病毒DNA提取试剂盒准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
2高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速:整个检测流程只需3小时。
4简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。
具有下列特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加):
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人细胞,M14细胞 2-氨基-4-甲基苯甲酸
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人细胞,MV3细胞 2,3,6-三氟苄胺
人黑素瘤细胞,WM266-4细胞 2-溴-3-羟基-6-甲基吡啶
柱式病毒DNA提取试剂盒0.188ng/ml大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试盒 Kinetensin
18.75ng/ml大鼠白三烯E4(LTE4)ELISA试盒K-Myosin Light Chain (11-23) amide
18.75pg/ml大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试盒(Val6,Ala7)-Kemptide
18.75pg/ml大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA试盒(Trp4)-Kemptide, Chocktide
4.688mIU/ml大鼠白病抑制因子(LIF)ELISA试盒Kemptide
0.938mIU/ml大鼠白病抑制因子受体(LIFR)ELISA试盒Entero-Kassinin
0.188ng/ml大鼠钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA试盒 Kassinin
0.563mIU/ml大鼠瘦素(LEP)ELISA试盒AF11377
0.188uIU/ml大鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试盒IL-1 Receptor Peptide (human)
0.938ng/ml大鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试盒IL-8 Inhibitor,Antileukinate