免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

参数规格：

抗体的生活习性：

(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。

(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。

(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在 上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

实验步骤:

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② SP1 (D4C3) Rabbit mAb (PE Conjugate)滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

抗体的多样性：

抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。

因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位（抗原结合簇），所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面，抗体本身是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性，它们表现出不同的血清学类型。
 ERK 3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

 ERK 5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

 ERK 6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

 GSK-3 Alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

 GSK-3 Beta（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

 PI-3 Kinase p110 beta（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

 PP2A（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

IKB-α（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

JNK/SAPK（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

MAP1b（MAP5）（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

TUBULIN（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

MAPK（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

CYTOCHROME C（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody

BRDU（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）Sandwich ELISA, Double Antibody
SP1 (D4C3) Rabbit mAb (PE Conjugate)(R)-(+)-二氨基烷通用引物 ITS2 (10uM)

1-(2-氯苯基)哌嗪通用引物 ITS4 (10uM)

四正基过钌(VII)铵通用引物 ITS5 (10uM)

肝素钠dNTPs Mix(25mM each)

瑞格非尼(水合物)dNTPs Mix(25mM each)

卡泊三醇通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)

2-Chloro-3-Bromo-5-Hydroxypyridine通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)

柚皮芸香苷通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)

AMYLOID BETA-PROTEIN (HUMAN, 1-40) TRIFLUOROACETATE通用反转录试剂盒(M-MLV，不含Taq酶)

2-基-5-烯基啶通用反转录试剂盒(M-MLV，不含Taq酶)

（R）-4-（叔氧基）-2-（（叔氧基羰基）氨基）-4-氧代通用RT-PCR试剂盒(AMV)

4-苯基钠盐通用RT-PCR试剂盒(AMV)

3-(2-AMINOPROPYL)INDOLE2×SYBR Green PCR Mastermix