海藻糖酶(TREH)真核蛋白标签选择

海藻糖酶(TREH)真核蛋白标签选择：

亲和标签：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类：一类是短肽类标签；一类是长肽以融合蛋白（fused partner）形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。

不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：

真核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表达载体的构建

c.      无内毒素的质粒抽提

d.      细胞瞬时转染

e.      表达小试，条件优化

f.       表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表达

h.      亲和纯化

i.        检测和鉴定

原核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体

b.      密码子优化

c.      基因合成/亚克隆

d.      转化表达菌株

e.      蛋白表达小试分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化

g.      如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。

h.      鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定

GZMH蛋白；表达蛋白的分析、纯化、检测

  诱导表达成功后，表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当，按一般的实验步骤做没太大的问题。