公司动态
大豆内源基因Lectin核酸检测试剂盒使用方法
2021-10-13
大豆内源基因Lectin核酸检测试剂盒使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)
载脂蛋白L1抗体
载脂蛋白L4抗体
载脂蛋白L5抗体
载脂蛋白M抗体
载脂蛋白O抗体
β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1抗体
共济失调性眼球运动功能丧失相关蛋白AOA1抗体
三号染色体开放阅读框抗体
腺嘌呤磷酸核糖转移酶抗体
磷酸化水通道蛋白2抗体
ADP核糖基化因子1抗体
乙型肝炎病毒X相关蛋白2抗体
ADP核糖基化因子5抗体
ADP核糖基化因子结合蛋白抗体
ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1抗体
ADP核糖基化因子相关蛋白1
琥珀酸裂解酶抗体
精氨酰tRNA合成酶抗体
真核翻译起始因子2C3抗体
真核翻译起始因子2C4抗体
Rho GTP酶激活蛋白15抗体
抑癌基因结合蛋白ARID1B抗体
E3连接酶蛋白ARIH2抗体
ADP核糖基化样因子1抗体
载脂蛋白L4抗体
载脂蛋白L5抗体
载脂蛋白M抗体
载脂蛋白O抗体
β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白1抗体
共济失调性眼球运动功能丧失相关蛋白AOA1抗体
三号染色体开放阅读框抗体
腺嘌呤磷酸核糖转移酶抗体
磷酸化水通道蛋白2抗体
ADP核糖基化因子1抗体
乙型肝炎病毒X相关蛋白2抗体
ADP核糖基化因子5抗体
ADP核糖基化因子结合蛋白抗体
ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1抗体
ADP核糖基化因子相关蛋白1
琥珀酸裂解酶抗体
精氨酰tRNA合成酶抗体
真核翻译起始因子2C3抗体
真核翻译起始因子2C4抗体
Rho GTP酶激活蛋白15抗体
抑癌基因结合蛋白ARID1B抗体
E3连接酶蛋白ARIH2抗体
ADP核糖基化样因子1抗体